Familiarize-se com todos os termos científicos usados em microscopia e imagem de fluorescência. Se não familiarizado com microscopia avançada, fluorescência e terminologia, busque tutoriais ou aulas formais. Além disso, deve conhecer componentes do microscópio. Microscopia de fluorescência invertida é completamente inadequada para iniciantes ou leigos.
Ligue a fonte de luz de campo claro, a câmera e a fonte de luz UV para detecção subsequente de sinal fluorescente. Coloque filtro de bloqueio ou escuro para bloquear luz UV até pronto para imagem fluorescente.
Coloque lâmina com espécime na platina e fixe com pinos do porta-lâmina. Ajuste condensador para "Campo Claro" para amostras coradas ou histológicas visíveis sob luz branca ou "Contraste de Fase" para não coradas. Procure espécime pela ocular.
Para reduzir intensidade de luz de campo claro, insira ou troque por filtros de densidade neutra fornecidos. Ajuste à intensidade apropriada. Ajuste ampliação girando lentamente botões de ajuste fino e grosso até resolução da amostra ficar nítida e clara. Não deve haver descoloração ou anomalias de raios refratados.
Ligue câmera (na maioria microscópios, só iniciando software) para software de captura e análise de imagem instalado pelo fabricante no computador acoplado. Configure parâmetros de escala, ampliação, objetivas, etc. Defina software para "Imagem Ao Vivo" em "Campo Claro".
Quando amostra pronta, desligue fonte de luz e ligue fonte de luz fluorescente (UV). Ajuste intensidade UV para aumentar ou diminuir sinal fluorescente da amostra.
Quando amostra pronta para fotografar, mude software de "Imagem Ao Vivo" para "Aquisição de Imagem". Defina abertura, tempo de exposição, foco e outros parâmetros. Nota: imagem observada via ocular não será mesma adquirida pela câmera e vista no software. Ajustes extensivos em parâmetros como foco e intensidade de fluorescência sempre serão necessários.
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