O sistema GasPak (BD/BBL e outros) cria ambientes anaeróbios para microbiologia sem câmaras anaeróbias. Dois componentes fazem funcionar: o sachê gerador de gás e a fita indicadora.
Gerador de Gás: Criando a Atmosfera Anaeróbia
Química
O sachê contém sais inorgânicos (borohidreto de sódio, bicarbonato de sódio) + ácido cítrico. Quando água é adicionada:
NaBH₄ + 2H₂O → NaBO₂ + 4H₂↑ Ácido cítrico + NaHCO₃ → CO₂↑ + H₂O + Na⁺ citrato
Mistura de Gases Produzida
- Hidrogênio (H₂): ~10–15% — reage com O₂ residual
- Dióxido de Carbono (CO₂): ~10–15% — muitos anaeróbios requerem CO₂ elevado
- Nitrogênio (N₂): Balanço (desloca O₂/N₂ atmosférico)
Mecanismo de Remoção de Oxigênio
Reação catalítica no catalisador de paládio do sachê:
2H₂ + O₂ → 2H₂O (catalisado por Pd)
Hidrogênio reduz oxigênio a vapor d'água. O₂ cai de 21% para <0.1% em 30–60 minutos. O frasco torna-se anaeróbio.
Fita Indicadora: Verificando Anaerobiose
Química
Contém azul de metileno (ou resazurina) indicador redox:
- Oxidado (O₂ presente): Azul (azul de metileno) / Rosa (resazurina)
- Reduzido (Anaeróbio): Incolor (leuco-azul de metileno) / Branco (resazurina reduzida)
Interpretação
| Cor da Fita | Significado | Ação |
|---|
| Azul/Rosa | Oxigênio presente — NÃO anaeróbio | Verifique vedação, troque sachê, estenda incubação |
| Incolor/Branco | Anaerobiose alcançada | Prossiga com incubação |
| Parcial/Intermediário | Em transição | Aguarde mais; verifique vedação do frasco |
Fluxo de Trabalho Operacional
- Inocular placas de ágar (brucella, sangue anaeróbio CDC, etc.)
- Colocar placas no frasco GasPak
- Adicionar fita indicadora (visível pela tampa)
- Adicionar sachê gerador de gás
- Adicionar 10–15mL água ao sachê (inicia reação)
- Vedar frasco IMEDIATAMENTE — prender tampa firmemente, verificar gaxeta
- Incubar 35–37°C
- Verificar indicador a 1h, 24h — deve ser incolor
Fatores Críticos de Sucesso
- Integridade da Vedação do Frasco: Gaxeta limpa, sem rachaduras, pressão uniforme da braçadeira. Testar com imersão em água se duvidoso.
- Sachês Novos: Sachês vencidos geram H₂ insuficiente. Armazenar fresco, seco.
- Atividade do Catalisador: Paládio envenenado por H₂S, metais pesados. Trocar tipo de sachê periodicamente.
- Requisito de CO₂: Alguns anaeróbios (ex.: Bacteroides) precisam 5–10% CO₂. GasPak fornece; sistemas alternativos (AnaeroPack) podem não fornecer.
- Não Abra Prematuramente: Reoxigenação mata anaeróbios estritos em minutos.
Alternativas
- AnaeroJar / AnaeroPack (Mitsubishi): Sem água; sachê gerador CO₂ + sachê absorvedor O₂
- Câmara Anaeróbia: Luva com mistura H₂/N₂/CO₂ — para alto volume/trabalho contínuo
- Meio Pré-Reduzido: Oxyrase, PRAS — para tubos únicos, não placas
O GasPak permanece o padrão-ouro para anaerobiose confiável e verificável em laboratórios clínicos e de pesquisa. A fita indicadora não é opcional — é sua prova de que a química funcionou.
